細胞名稱：小鼠表皮細胞JB6Cl30-7b

產品規格：T25培養瓶x1；1.5ml凍存管x2

細胞數量：1x10^6；1x10^6

保存溫度：37℃；-198℃

運輸方式：常溫保溫運輸；干冰運輸

安全等級：1

用途限制：僅供科研2類

培養體系：DMEM高糖培養基（Hyclone）+10%胎牛血清（Gibco）+1%雙抗（Hyclone）

培養溫度：37℃

二氧化碳濃度：5%

簡介：小鼠表皮細胞JB6Cl30-7b細胞取自ICR小鼠，貼壁培養，不規則形態。

注釋：倍增時間46h。

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參考文獻

Frizzled4在小鼠毛囊周期中的表達

,PP.631-635

陳年,伍津津,邱偉明,唐輝,唐書謙

Keywords:Frizzled,毛囊,小鼠,Wnt,抗體

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Abstract:

目的探討Wnt蛋白的受體分子Frizzled4在小鼠毛囊周期中的表達、功能及其意義。方法利用實時定量PCR、RT-PCR、Westernblot和免疫熒光等技術分別檢測Frizzled4mRNA和蛋白在毛囊生長期（P1d、P3d、P8d）、退化期（P16d）和靜止期（P21d）中的表達。免疫熒光技術檢測Frizzled4在小鼠皮膚上皮細胞JB6cl30-7b中的定,位，MTT檢測用抗Frizzled4抗體處理JB6cl30-7b細胞后的增殖情況。結果在毛囊生長期早期，Frizzled4mRNA和蛋白在P1d的小鼠背部皮膚中表達明顯，膜表達于Bulge、毛囊外根鞘及毛球外側。在P3d，Frizzled4蛋白表達明顯上調，主要表達于Bulge、毛囊外根鞘、內根鞘、precortex、部分毛球外側。在生長中期（P8d），Frizzled4蛋白的表達最強，集中在毛囊Bulge、外根鞘上段及內根鞘。當毛囊進入退化期（P16d），Frizzled4mRNA和蛋白的表達顯著降低（P<0.05），此時主要定,位于Bugle。而在靜止期，Frizzled4mRNA和蛋白表達最低（P<0.05），只有少量Frizzled4陽性細胞出現在毛囊Bulge。免疫熒光技術檢測Frizzled4蛋白同樣也在JB6cl30-7b細胞膜中表達。MTT結果顯示與對照組相比，10μg/mL的抗Frizzled4抗體處理JB6cl30-7b細胞后光密度值明顯降低（P<0.05），而20μg/mL的抗Frizzled4抗體處理后的光密度值降到最低（P<0.05）。結論Frizzled4在毛囊周期中的表達具有時空特異性。伴隨著毛囊的生長，Frizzled4的mRNA和蛋白水平都呈現高表達，隨著毛囊的退化而表達降低，直至靜止期維持低表達水平。拮抗Frizzled4蛋白的作用促使細胞增殖受到明顯抑制，提示Frizzled4的表達與毛囊細胞的增殖和分化相關。

驗收細胞注意事項

1、收到小鼠表皮細胞JB6Cl30-7b細胞，請查看瓶子是否有破裂，培養基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快聯系。

2、收到小鼠表皮細胞JB6Cl30-7b細胞，如包裝完好，請在顯微鏡下觀察細胞。,由于運輸過程中的問題，細胞培養瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會出現細胞懸浮的情況，出現此狀態時，請不要打開細胞培養瓶，應立即將培養瓶置于細胞培養箱里靜止3-5小時左右，讓細胞先穩定下，再于顯微鏡下觀察，此時多數細胞會重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁，請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理。

3、收到小鼠表皮細胞JB6Cl30-7b細胞后，請鏡下觀察細胞，用恰當方式處理細胞。若懸浮的細胞較多，請離心收集細胞，接種到一個新的培養瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養基，使用進口胎牛血清。剛接到細胞，若細胞不多時血清濃度可以加到15％去培養。若細胞迏到80%左右，血清濃度還是在10％。

4、收到小鼠表皮細胞JB6Cl30-7b細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養瓶中培養基吸出，留下5-10ML培養基繼續培養：超過80%匯合度時，請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞，吸出培養液，1000轉/分鐘離心3分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。

5、將培養瓶置于37℃培養箱中培養，蓋子微微擰松。吸出的培養基可以保存在滅菌過的瓶子里，存放于4℃冰箱，以備不時之需。

6、24小時后，小鼠表皮細胞JB6Cl30-7b細胞形態已恢復并貼滿瓶壁，即可傳代。（貼壁細胞）將培養瓶里的培養基倒去，加3-5ml（以能覆蓋細胞生長面為準）PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml0.25%含EDTA的胰酶消化，消化時間以具體細胞為準，一般1-3分鐘，不超過5分鐘。可以放入37℃培養箱消化。輕輕晃動瓶壁，見細胞脫落下來，加入3-5ml培養基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之完全脫落，然后將溶液吸入離心管內離心，1000rpm/5min。棄上清，視細胞數量決定分瓶數，一般一傳二，如細胞量多可一傳三，有些細胞不易傳得過稀，有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶，以具體細胞和經驗為準。（懸浮細胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可。

7、貼壁細胞，懸浮細胞。嚴格無菌操作。換液時，換新的細胞培養瓶和換新鮮的培養液，37℃，5%CO2培養。

特別提醒：原瓶中培養基不宜繼續使用，請更換新鮮培養基培養。