細胞描述

該細胞系的母細胞株MM.1是從一位對類固醇療法產生抗藥性的多發性骨髓瘤患者的外周血中建立的。MM.1R對地塞米松耐藥。近緣細胞系MM.1S也是從MM.1中分離出來的，但對地塞米松敏感。該細胞復蘇后需要兩周左右才能恢復正常生長。

細胞特性

1）來源：人、女性、外周血

2）形態：成淋巴瘤細胞，懸浮和輕微的貼壁

3）含量：>1x10^6

4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

6）用途：僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。

3）懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和細胞在1000RPM條件下離心5min，棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基）。

4）半貼細胞（或貼壁不牢細胞）：T25瓶置于37℃培養箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在70%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮的細胞離心后用完全培養基重懸后打回到原來的培養瓶中繼續培養，若細胞生長到70%-90%可以對細胞進行傳代，在傳代過程中，需要收集T25瓶中懸浮的細胞離心后回收。

5）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。收到細胞后第,一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代。

細胞培養步驟

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備1640基礎培養基,優質胎牛血清10%，P/S青霉素-鏈霉素1%

2）注意事項：

a.該細胞同時存在懸浮生長和輕微的貼壁狀態。

b.該細胞復蘇后需培養2周左右時間，才能恢復正常生長狀態。

c.細胞密度不可過高，在細胞匯合前進行傳代，否則容易成團。

3）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

參考傳代比例:1:3-1:6，參考換液頻率:2-3天

4）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二．細胞處理：

復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度和拍照。

2細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳代培養。

該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞，傳代可以參考以下方法：

1）懸浮狀態下生長的細胞，可以通過向培養瓶中添加完全培養基來維持細胞的生長狀態，一般情況下細胞密度維持在1×105~1×10^6個/mL（不同細胞對密度要求不同，具體可以參考細胞說明書）可以維持細胞的正常生長。懸浮細胞的收集：將培養瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2)．貼壁細胞的的消化，pbs清洗1-2次由于細胞貼壁不牢，pbs清洗過程中會有細胞脫落，所以pbs清洗液需要收集到離心管中。清洗后的貼壁細胞按正常的貼壁細胞處理。加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%血清的培養基來終止消化。

3）將收集到的懸浮細胞，消化下貼壁細胞和pbs清洗液中的細胞以1000rpm,5min離心重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3細胞凍存：收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

下面T25瓶為例；

1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入3-4ml含10%血清的完全培養基來終止消化，收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個活細胞/ml。

2．1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

3．將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。