產(chǎn)品信息

名稱PUMC-HUVEC-T1（SV40T轉(zhuǎn)化人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞）

種屬人

生長(zhǎng)特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣

背景描述PUMC-HUVEC-T1形態(tài)呈現(xiàn)為典型的鵝卵石樣排列，已證明在體外可傳至40代。PUMC-HUVEC-T1內(nèi)皮標(biāo)記vWF、CD31、CD34均陽(yáng)性，可結(jié)合凝集素，電鏡下可見緊密連接和W-P小體，Matrigle上可形成管型。不同代數(shù)的HUVEC-T1細(xì)胞核型正常穩(wěn)定（P12、P13、P19、P38），裸鼠體內(nèi)接種不成瘤（P9和P33）。

生長(zhǎng)培養(yǎng)基DMEM＋0.01mg/mL Insulin＋1%NEAA+10%FBS(164210)＋1%P/S

推薦換液頻率2~3次/周

凍存條件凍存液：55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO溫度：液氮

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.收到細(xì)胞后首次傳代推薦將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，建議凍存一支備用，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2到1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

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